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    RT-qPCR專用預混液

    HiScriptIII RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

    更高效的兩步法RT-qPCR預混液(去基因組)

    簡便快捷的操作:5 × HiScript?III qRT SuperMix包含逆轉錄反應所需的所有組分,只需加入模板 RNA,20 min內即可完成逆轉錄反應

    廣泛的模板兼容性:可兼容不同物種,完整度較差的 RNA 模板

    超強的雜質耐受度:對于逆轉錄常見雜質如乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸等,具有超強的耐受度

    卓越的逆轉錄效率:與常見市售逆轉錄產品相比,HiScriptIII RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 逆轉得到的cDNA定量CT值最小,具有卓越的逆轉錄效率

    1.簡便快捷的操作

    HiScriptIII RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)(Vazyme #R323)包含基因組清除模塊,可徹底去除 RNA 模板中殘留的基因組 DNA;同時Vazyme #R323 包含逆轉錄反應所需的所有組分,只需加入模板 RNA,20 min 內即可完成逆轉錄反應,操作簡便快捷。

    2.廣泛的模板兼容性

    分別以 HeLa 細胞、小鼠肝臟、擬南芥葉片的完整 RNA 與降解 RNA 為模板,使用 HiScript? III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme#R323)以及市售常見品牌逆轉錄試劑 (Supplier T) 進行逆轉錄。將得到的 cDNA 進行多個基因的 qPCR 定量分析,以不同基因為橫坐標,擴增 CT 值為縱坐標繪圖,比較不同產品的逆轉錄效率。從圖中可以看出,以 HeLa 細胞、小鼠肝臟、擬南芥葉片完整 RNA 以及降解 RNA 為模板進行逆轉錄定量,Vazyme #R323的擴增CT 值小于或等于T公司相關產品,說明Vazyme #R323逆轉不同物種RNA、完整度較差的RNA模板皆具有卓越的逆轉錄效率。

    3. 超強的雜質耐受度

    在RNA的提取過程中常常因操作或樣本的特殊性導致RNA中混有有機試劑或雜質,這些物質的殘留會嚴重影響逆轉錄效率。乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸是 RNA 提取過程中較為常見的雜質,測試其對逆轉錄效率的影響。

    分別對上述 5 種雜質設置 3 個不同濃度梯度,添加至 HiScript ? III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 逆轉錄體系中,將得到的 cDNA 進行 qPCR 檢測。以不同濃度雜質為橫坐標,△CT  (△CT = 含雜質逆轉錄 cDNA 擴增 CT 值 – 未含雜質逆轉錄 cDNA 擴增 CT 值 ) 為縱坐標繪圖。從圖中可以看出,△CT 均小于 0.15,說明 Vazyme #R323 對上述 5 種常見雜質具有極強的耐受度。

    4. 卓越的逆轉錄效率

    以 100 ng HeLa RNA 為模板,使用 HiScript? III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 以及市售其他逆轉錄產品 ( 分別來自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti),按照各自說明書推薦程序進行逆轉錄反應。將得到的 cDNA 進行多個基因的 qPCR 定量分析。以不同公司產品為橫坐標,△CT (△CT = Vazyme #R323 cDNA 擴增 C值 – 各公司逆轉錄產品 cDNA 擴增 CT 值 ) 為縱坐標繪圖。從圖中可以看出,除一些體系Th1 △CT >0 外,其余公司逆轉錄產品均△CT <0,說明 Vazyme #R323 逆轉錄效率優于 Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相關逆轉錄產品。

       

    HiScript? III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)為HiScript? II二代產品的升級產品,包含全新升級三代逆轉錄酶 HiScript? III Reverse Transcriptase與針對逆轉錄特殊優化的最適 Buffer,進一步提高了cDNA合成效率。本產品包含基因組清除模塊,可徹底去除 RNA 模板中殘留的基因組 DNA,確保后續定量結果更加真實可靠。與此同時,本產品將所有逆轉錄反應所需組分融于一管,只需加入模板 RNA,20 min 內即可完成逆轉錄反應,同時終止gDNA wiper作用,保證cDNA的完整性,并減少操作步驟,有效防止在操作過程中帶來的污染。

    組分

    R323-01 (100 rxn)

    RNase-free ddH2O

    2 ×1 ml

    4 ×gDNA wiper Mix

    400 μl

    5 ×HiScript III qRT SuperMixa

    400 μl

    5 ×No RT Control Mixb

    40 μl

    a. 包含Buffer、dNTP、HiScript?III Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)20VN primer mix。

    b. 除不含HiScript?III Reverse Transcriptase外,其余成分與5 × HiScript?III qRT SuperMix 相同,用于配制No RT對照反應。

    - 30℃~- 15℃保存。